Het net samengestelde team, de Guardians of the Galaxy, vindt een mystieke schatkaart dat leidt naar een krachtig wapen: Het Kosmische Zaad. De helden moeten het vinden, beschermen en uiteindelijk vernietigen om te zorgen dat de kracht ervan niet voor het kwaad wordt gebruikt door de galactische slechterik Thanos, de weer tot leven gewekte Ronan en de sluwe Loki. Ze bezoeken meerdere planeten en komen zo steeds meer te weten over hun verleden. Als ze tijdens hun zoektocht op de Aarde terecht komen, krijgen ze met duistere krachten te maken.